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　　一.目的

　　本規(guī)程旨在為無(wú)菌操作及無(wú)菌室的保護(hù)提供一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程。

　　二.適用范圍

　　微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室

　　三.責(zé)任者 QC主管生測(cè)員

　　四.定義 無(wú)

　　五.安全注意事項(xiàng)

　　嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止微生物污染;操作人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。

　　六.建造規(guī)程

　　1. 無(wú)菌室應(yīng)設(shè)有無(wú)菌操作間和緩沖間，無(wú)菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級(jí)，室內(nèi)溫度保持在20-24℃，濕度保持在45-60%。超凈臺(tái)潔凈度應(yīng)達(dá)到100級(jí)。

　　2. 無(wú)菌室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。

　　3. 嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染者應(yīng)停止使用。

　　4. 無(wú)菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新潔爾滅溶液，等等。

　　5. 無(wú)菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無(wú)菌室的潔凈度符合要求。

　　6. 需要帶入無(wú)菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過(guò)適宜的方法滅菌。

　　7. 工作人員進(jìn)入無(wú)菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進(jìn)入無(wú)菌室進(jìn)行操作。

　　8. 無(wú)菌室使用前必須打開(kāi)無(wú)菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時(shí)打開(kāi)超凈臺(tái)進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時(shí)清理無(wú)菌室，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。

　　9. 供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開(kāi)啟，以防污染。檢查前，用70%的酒精棉球消毒外表面。

　　10. 每次操作過(guò)程中，均應(yīng)做陰性對(duì)照，以檢查無(wú)菌操作的可靠性。

　　11. 吸取菌液時(shí)，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。

　　12. 接種針每次使用前后，必須通過(guò)火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。

　　13. 帶有菌液的吸管，試管，培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來(lái)蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒，24小時(shí)后取出沖洗。

　　14. 如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用5%石碳酸溶液或3%的來(lái)蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時(shí)，應(yīng)立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。

　　15. 凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后，才能在水下沖洗，嚴(yán)禁污染下水道。

　　16. 無(wú)菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在超凈工作臺(tái)開(kāi)啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無(wú)菌培養(yǎng)皿若干，無(wú)菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，證明無(wú)菌后，取平板3～5個(gè)，分別放置工作位置的左中右等處，開(kāi)蓋暴露30分鐘后，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，取出檢查。100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過(guò)1個(gè)菌落，10000級(jí)潔凈室平均不得超過(guò)3個(gè)菌落。如超過(guò)限度，應(yīng)對(duì)無(wú)菌室進(jìn)行*消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。

　　七.參照 《藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》 《中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》中 (無(wú)菌檢查法)章節(jié) 中華人民共和國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) YY/T0188.6-1995《藥品檢驗(yàn)操作規(guī)程》

　　八.適用部門(mén)

　　質(zhì)量管理部

　　無(wú)菌室技術(shù)指導(dǎo)說(shuō)明

　　在獲得了無(wú)菌環(huán)境和無(wú)菌材料后，我們還要保持無(wú)菌狀態(tài)，才能對(duì)某種特定的已知微生物進(jìn)行研究或利用它們的功能，否則外界的各種微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的現(xiàn)象，在微生物學(xué)中我們叫做污染雜菌。防止污染是微生物學(xué)工作中十分關(guān)鍵的技術(shù)。一方面是*滅菌，另一方面防止污染，是無(wú)菌技術(shù)的兩個(gè)方面。另外，我們還要防止所研究的微生物，特別是致病微生物或經(jīng)過(guò)基因工程改造了的本來(lái)自然界不存在的微生物從我們的實(shí)驗(yàn)容器中逃逸到外界環(huán)境中去。為了這些目的，在微生物學(xué)中，有許多措施。

　　無(wú)菌室一般是在微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)專辟一個(gè)小房間。選用彩鋼板及鋼化玻璃建造。面積不宜過(guò)大，約 5 — 20 平方米即可，高 2.5 米左右。無(wú)菌室外要設(shè)一個(gè)緩沖間，緩沖間的門(mén)和無(wú)菌室的門(mén)不要朝向同一方向，以免氣流帶進(jìn)雜菌。無(wú)菌室和緩沖間都必須密閉。室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過(guò)濾裝置。無(wú)菌室內(nèi)的地面、墻壁必須平整，不易藏污納垢，便于清洗。工作臺(tái)的臺(tái)面應(yīng)該處于水平狀態(tài)。無(wú)菌室和緩沖間都裝有紫外線燈，無(wú)菌室的紫外線燈距離工作臺(tái)面 1 米。工作人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)穿滅過(guò)菌的服裝，戴帽子。

　　當(dāng)前無(wú)菌室多存在于微生物工廠，一般實(shí)驗(yàn)室則使用超凈臺(tái)。超凈臺(tái)其主要功能是利用空氣層流裝置排除工作臺(tái)面上部包括微生物在內(nèi)的各種微小塵埃。通過(guò)電動(dòng)裝置使空氣通過(guò)過(guò)濾器具后進(jìn)入工作臺(tái)面，使臺(tái)面始終保持在流動(dòng)無(wú)菌空氣控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流動(dòng)的氣簾防止外部帶菌空氣進(jìn)入。

　　無(wú)菌操作技術(shù)當(dāng)前不僅在微生物學(xué)研究和應(yīng)用上起著舉足輕重的作用，而且在許多生物技術(shù)中也被廣泛應(yīng)用。例如轉(zhuǎn)基因技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)等。